国家外来动物疫病研究中心确诊我国首例非洲

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非洲猪瘟（Africanswinefever，ASF）是由非洲猪瘟病毒引起猪的一种急性、热性、高度接触性动物传染病，临床上以高热、网状内皮系统出血和高死亡率为特征，易感猪群的病死率高达%。年8月1日，国家外来动物疫病研究中心接到辽宁省沈阳市沈北区发现ASF临床可疑病例的报告（图1）。截至8月1日，发病猪场累计死亡47头，对刚病死的2头猪剖检发现：脾脏极度肿大，严重梗死，质脆易碎，其中一头猪脾肿大至少10倍，一头猪脾肿大5~7倍；肺出血、质硬，有间质性肺炎变化；下颌淋巴结、肠系膜淋巴结出血，切面呈大理石样变；胃浆膜面弥漫性出血；肾肿胀明显、色淡，未见出血点；扁桃体见陈旧性出血，符合ASF症状。

图1　发病场地理位置

国家外来动物疫病研究中心科研人员立即开展了病原学检测。研究人员采集上述2头病死猪的剖检病料（包括全血、脾脏、淋巴结、扁桃体）和血清样品，提取病料DNA后，分别用荧光定量PCR和普通PCR，对ASFVp72基因片段进行扩增并测序。同时，用ASFELISA抗体检测试剂盒检测血清样品中的抗体。

荧光定量PCR检测结果显示，采自2只病死猪的8份组织样品和全血中都能检测到ASFV特异性扩增曲线（图2）。

图中扩增曲线从左至右依次为P、全血1、脾1、全血2、淋巴结2、肾2、淋巴结1、肾1、脾2

图2　实时定量PCR扩增结果

普通PCR扩增结果显示，7个样本在bp左右有特异性扩增条带，与阳性对照一致（图3）。

1~8分别为全血1、淋巴结1、肾1、脾1、全血2、淋巴结2、肾2、脾2

图3　普通PCR检测结果

对该毒株p72基因片段普通PCR产物进行测序，获得了长度为bp的序列（图4）。应用邻接法对扩增的p72基因序列绘制遗传发生树（图5）。结果显示，该样本病毒属于基因II型，与目前在俄罗斯和东欧流行的格鲁吉亚毒株同属于一个进化分支。

图4　样本p72基因片段测序结果

图5　P72基因遗传进化分析

抗体检测结果显示，32份血清样品的ASFV特异性抗体均为阴性。

本次疫情的来源有待进一步调查。该猪场生物安全条件较差，紧临车辆繁忙的乡间公路，场区出入口无消毒池。病死猪在当地兽医部门监督下就近掩埋处理，有相应的生猪保险理赔记录。剩余存栏的头生猪临床未见异常。

ASFV基因II型流行于非洲东南部，年传至格鲁吉亚，并扩散到俄罗斯联邦和东欧地区，已在高加索地区定殖；年，该基因型病毒向东长距离跨越式传播至俄罗斯远东地区伊尔库茨克，导致传入我国的风险空前升高。本次暴发流行的毒株为基因II型，与俄罗斯及东欧流行的毒株属同一分支，提示疫情可能来自俄罗斯和东欧疫情国家。为进一步确定病毒与俄罗斯和东欧流行株的差异，研究人员正在对全基因组序列进行分析。

值得注意的是，ASFV在未经高温处理的肉品中存活能力很强，未经高温处理的泔水、烟熏肉、风干肉、腌肉、火腿等也是造成病毒跨区域传播的重要因素。历史上，多起跨境传播的ASF疫情与航空器、列车运载上述猪肉制品的处理不当、感染ASF野猪移动有关。目前，应加强流行病学调查和主动监测排查工作，特别对病死猪的检测，应重点